A clarificação das suspeitas associadas aos sintomas de foro reumatológico são essencialmente conseguidas através da avaliação/detecção serológica dos anticorpos específicos de doenças (ex.: anticorpos anti-nucleares, ANAs)

Não obstante o desenvolvimento de técnicas e métodos tais como ELISA (Imunoensaio enzimático em fase sólida), o método de IFI para o screening dos testes ANA é o método gold standard no processo de diagnóstico para as desordens sistémicas do foro reumatológico tais como o Lúpus Eritematoso Sistémico (SLE), Sindroma de Sjögren (SS), Esclerose Sistémica Progressiva (PSS), Dermatomiosites – Polimiosites (DM/PM) ou Doença Mista do Tecido Conjuntivo (MCTD).

As guidelines Internacionais recomendam que o screening dos ANA deve ser realizado em linhas célulares do carcinoma do epitélio humano (HEp-2 ). Outros substratos celulares tais como Crithidia luciliae ( para a detecção de anticorpos anti dsDNA) e os neutrófilos humanos (para a detecção de anticorpos anti – citoplasma de neutrófilo, ANCA) são utilizados em rotina por metodologia IFI.

Os autoanticorpos dão origem a padrões de fluorescência característicos cuja análise depende do conhecimento e da interpretação subjectiva do investigador, existindo assim uma elevada variabilidade intra e inter laboratorial sendo este o maior problema no diagnóstico das doenças autoimunes.

O incremento de trabalho e a necessidade de standardizar e realizar uma avaliação reprodutivel dos testes baseados no método de IFI conduziram os laboratórios de autoimunidade no sentido da automatização.

O novo sistema Zenit G Sight da A. Menarini Diagnostics foi especialmente desenvolvido para ultrapassar estas questões especificas da imunofluorescência, tornando-o particularmente adequado para o diagnóstico serológico automatizado das patologias autoimunes na rotina do laboratório de autoimunidade.

Os principais passos do método são:

1. Diluição das amostras de soro (por ex. 1:80) e incubação no substrato fixado na lâmina por 30 min em câmara húmida à TA.
2. Incubação por 30 min a TA com conjugado de ovelha anti IgG Humana marcado com FITC (isocianato de fluoresceina)
3. Análise visual ou automática das lâminas

A detecção de ANA em células HEp-2 gera padrões fluorescentes. Os cinco principais padrões que podem ser encontrados são:

* Os padrões ANA por fluorescência em células HEp-2 são aqui apresentados porque esta é a metodologia visual/automatizada mais utilizada no screening das doenças reumáticas.

O ensaio por IFI é um método de baixo custo, simples e rápido para o screening autoimune, no entanto tem várias desvantagens que podem ser facilmente ultrapassadas com o Zenit G Sight.

• Análise subjectiva
• Número limitado de amostras
• Screening de amostras demorado
• Decaimento da Fluorescência
• Requer espaço para arquivo organizado
• Difícil troca de resultados entre laboratórios

• Quantificação objectiva e reconhecimento de padrão.
• Gestão de um elevado volume de amostras
• Discriminação eficiente entre resultados +/-
• Dados e imagens digitalizadas
• Armazenamento e fácil acesso de ficheiros relativos aos relatórios de doente
• Acesso on-line e troca de dados

• Preciso
  Fornece aos clínicos uma ajuda preciosa no diagnóstico através de um relatório quantitativo/qualitativo completo relativo ao status serológico dos autoanticorpos
• Confiável
  Fornece resultados que são reprodutiveis e comparáveis entre laboratórios
• Custo - Benefício
  Organiza o elevado volume de trabalho em grandes laboratórios, maximizando a eficiência e optimização de recursos humanos
• Seguro
  Melhorara a gestão de resultados e garante a segurança dos mesmos

Os componentes de hardware são completamente controlados por software e estão maioritariamente envolvidos no processo de aquisição digital de imagem.

• Microscópio de Fluorescência
  O microscópio do Zenit G Sight está equipado com um mecanismo de autofocus de elevada performance (focagem de 5 a 13 pontos por poço) e é fornecido com duas objectivas (4x, 40x). Objectivas adicionais podem ser fornecidas (o sistema pode acomodar até 6 objectivas).
• Fonte de luz LED
  A tecnologia LED tem inúmeras vantagens em relação às fontes de luz convencionais, como por exemplo: fornece uma luz focada, gera pouco calor e não tem manutenção (fonte de luz de longa vida). No entanto as fontes de luz LED não revelam o FITC tão rápido como as lâmpadas de mercúrio.

COMPONENTES DE HARDWARE

• Fase de Scan
  A etapa de Scan do Zenit G Sight é motorizada e tem capacidade para 5 lâminas e está equipado com um leitor de código de barras. Para aumentar a exactidão, uma grande área é alvo de scan (de 1 a 220 campos por poço), assim o tempo médio de scanning para uma lâmina de 14 poços pode variar de 30 a 60 minutos.
• Camara Digital
  A câmara CCD de elevada sensibilidade do sistema Zenit G Sight captura imagens claras de contrastre fluorescente.